Journal of Rafsanjan University of Medical Sciences

fa ارزیابی روش الایزا با استفاده از آنتی‌ژن‌های دفعی – ترشحی توکسوپلاسما برای تشخیص توکسوپلاسموزیس در موش صحرایی Evaluation of ELISA Method Using the Excreted / Secreted Antigens of Toxoplasma for Toxoplasmosis Serodiagnosis in Rat انگل شناسي Parasitology پژوهشي Research <roundrect id="_x0000_s1026" style="MARGIN-TOP: 4.8pt Z-INDEX: -3 LEFT: 0px MARGIN-LEFT: 19.9pt WIDTH: 447.6pt POSITION: absolute HEIGHT: 456pt TEXT-ALIGN: left" arcsize="892f" ><textbox style="mso-next-textbox: #_x0000_s1026" ><table cellspacing="0" cellpadding="0" width="100%"><tbody><tr><td style="BORDER-RIGHT: #ece9d8 BORDER-TOP: #ece9d8 BORDER-LEFT: #ece9d8 BORDER-BOTTOM: #ece9d8 BACKGROUND-COLOR: transparent"><div> </div></td></tr></tbody></table></textbox /><wrap anchorx="page" ></roundrect />خلاصهسابقه وهدف: با توجه به گزارش‌های قبلی، به نظر می‌رسد آنتی‌ژن‌های دفعی – ترشحی(E/SA) توکسوپلاسما گوندی نشانگرهای مناسبی برای تشخیص توکسوپلاسموزیس با روش‌های سرولوژی باشند. در مطالعات قبلی معمولاً مایع رویی کشت سلولی توکسوپلاسما یا محیط کشت RPMI-1640 که تاکی‌زوئیت‌های تک یاخته در آن انکوبه شده بودند، به عنوان ترکیب حاوی E/SA استفاده شده‌اند. این مطالعه به منظور ارزیابی روش الایزا با استفاده از مایع صفاق موش سفید کوچک آزمایشگاهی آلوده به توکسوپلاسما (یکی از ترکیبات حاوی آنتی‌ژن‌های دفعی – ترشحی توکسوپلاسما) به عنوان آنتی‌ژن، برای تشخیص توکسوپلاسموزیس در موش صحرایی صورت گرفت.مواد و روش‌ها: مایع صفاق موش سفید کوچک آزمایشگاهی که 3 روز قبل به طریق تزریق داخل صفاقی با تاکی‌زوئیت‌های توکسوپلاسما آلوده شده بود، کشیده شد و با دور ×g750 به مدت 15 دقیقه سانتریفوژ گردید سپس رسوب سولفات آمونیوم اشباع (30%) (ترکیب حاوی آنتی‌ژن‌های دفعی – ترشحی) از مایع ‌رویی آن تهیه شد.40 سر موش صحرایی نر با سن 10-7 هفته و غیرآلوده به توکسوپلاسما) Dye - Testمنفی( انتخاب و به هر کدام 106×4 تاکی‌زوئیت توکسوپلاسما از طریق داخل صفاقی تزریق گردید. به منظور انتخاب نمونه سرم مناسب از مراحل سیر آلودگی، سرم روزهای 8، 15، 22 و 60 بعد از آلودگی موش‌های صحرایی تهیه شد در مرحله بعد نمونه‌های سرم روزهای فوق مربوط به10 سر از آن‌ها به روش dye-test و سرم روزهای 15 و 60 تمام حیوانات بعد از آلودگی نیز به عنوان نمونه‌های مناسب هم به روش dye-test و هم به روش الایزا با استفاده از ترکیب حاوی E/SA تهیه شده به طریق مورد نظر در این مطالعه، آزمایش شدند.یافته‌ها: با توجه به نتایج آزمایش سرم روزهای مختلف موش‌های صحرایی آلوده، سرم روز 15 و60 به عنوان نمونه‌های مناسب انتخاب شدند تحت شرایط مورد نظر در این بررسی، Cut-off تست الایزا با 99% اطمینان برابر 33/0 تعیین گردید که میزان جذب نوری تمام نمونه سرم‌های روزهای 15 و 60 آلودگی و هم‌چنین دو مورد از سرم‌های منفی بالاتر از آن بدست آمد. ویژگی و حساسیت آزمون نیز به ترتیب 95% و 100% تعیین شد.نتیجه‌گیری: نتایج این مطالعه نشان ‌داد که روش الایزا تحت شرایط مورد نظر در این مطالعه و با استفاده از رسوب سولفات آمونیوم اشباع (30%) مایع صفاق موش سفید کوچک آزمایشگاهی آلوده به توکسوپلاسما، آزمون نسبتاً مناسبی برای تشخیص توکسوپلاسموزیس در مدل حیوانی مورد مطالعه می‌باشد.<rect id="_x0000_s1027" style="MARGIN-TOP: 24.4pt Z-INDEX: 2 LEFT: 0px MARGIN-LEFT: 0px WIDTH: 177.65pt POSITION: absolute HEIGHT: 18pt TEXT-ALIGN: left" strokecolor="white" ><wrap anchorx="page" ></wrap /></rect /><rect id="_x0000_s1028" style="MARGIN-TOP: 45.65pt Z-INDEX: 3 LEFT: 0px MARGIN-LEFT: 0px WIDTH: 149.6pt POSITION: absolute HEIGHT: 27pt TEXT-ALIGN: left" strokecolor="white" ><wrap anchorx="page" ></wrap /></rect />واژه‌های کلیدی: توکسوپلاسموزیس، الایزا، آنتی‌ژن‌های دفعی - ترشحی، توکسوپلاسما گوندی Evaluation of ELISA Method Using the Excreted / Secreted Antigens of Toxoplasma for Toxoplasmosis Serodiagnosis in Rat SH. Abdollahi PhD1*, A.Mahmoudzadeh PhD2, M. Bahadoran MSc 3 1 Assistant Professor, Dept. of Microbiology, Faculty of Medicine, Rafsanjan University of Medical Sciences, Rafsanjan, Iran 2- Associated Professor, Dept. of Micribiology, Faculty of Medic ine, Baghiatallah University, Tehran, Iran 3- Academic Member, Dept of Microbiology, Faculty of Medicine, Rafsanjan University of Medical Sciences, Rafsanjan, Iran Background: Many studies have reported that Toxoplasma gondii excreted/secreted antigens (E/SA) appear to be a suitable marker for toxoplasmosis serodiagnosis. Most of those studies have used E/SA obtained from supernatent of toxoplasma cell culture, or by incubating tachyzoites in cell free media (RPMI- 1640). The present study, evaluated the ELISA method, using the components of peritoneal fluid of infected mice (as another source of E/SA), for toxoplasmosis diagnosis in rat. Materials and Methods: Peritoneal fluids of infected mice by interaperitoneal inoculation (IP) with toxoplasma tachyzoits were collected after 3 days of infection and centrifuged at 750×g for 15 min, then the supernatant was precipitated with ammonium solphate soulution (30% saturated) Forty noninfected (male) rats (7-10 weeks old) were injected with 4 × 106 toxoplasma tachyzoits IP and their serum samples were collected at 8, 15, 22 and 60 days after the infection. Then 10 samples from each day were tested by Dye- test. The sera of 15 and 60 days after infection of all animals were selected as suitable samples. Then the sera of these days were tested by the dye-test and ELISA using E/SA. Results: The cut-off point of ELISA with 99% confidence was found to be 0.33 and optical density (OD) of all the sera samples of 15 and 60 days after infection and 2 negative sera were over than test cut-off. Moreover, sensitivity and specificity of the method were determined to be 100% and 95%, respectively. Conclusion: Our findings showed that ELISA in the condition of using ammonium sulphate precipitation has a good enough sensitivity and specificity for toxoplasmosis diagnosis in rat. Key words: Toxoplasmosis, Excreted/Secreted Antigens, ELISA, Toxoplasma Gondii *Corresponding author Tel: (0391) 5234003, Fax:(0391)5225209, E-mail:habdollahi38@yahoo.com Journal of Rafsanjan University of Medical Sciences and Health Services, 2004, 3(4):232-242 ،توکسوپلاسموزیس، الایزا،آنتی‌ژن‌های دفعی،ترشحی،توکسوپلاسما گوندی 232 242 http://journal.rums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-101-1&slc_lang=fa&sid=1 SH. Abdollahi سیدحسین عبداللهی habdollahi38@yahoo.com 690031947532846002800 690031947532846002800 Yes A. Mahmoudzadeh عباس محمودزاده 690031947532846002801 690031947532846002801 No M. Bahadoran مهران بهادران 690031947532846002802 690031947532846002802 No