Journal of Rafsanjan University of Medical Sciences

fa بررسی ترکیب محیط کشت پیچیده برای بهبود تولید ایمونوتوکسین اونتاک بوسیله سویه اشریشیاکلی نوترکیب Investigation of the Complex Culture Medium Composition for Improved Production of ONTAK Immunotoxin by Recombinant Escherichia Coli ميكروبيولوژي Microbiology پژوهشي Research چکیده <o:p /> زمینه و هدف: در سال‌های اخیر به منظور درمان بسیاری از بیماری‌ها از جمله سرطان به روش‌های زیستی روی آوردند که یکی از پر کاربردترین این روش‌ها استفاده از پروتئین‌های نوترکیب می‌باشد. <a name="OLE_LINK51"></a><a name="OLE_LINK50">ایمونوتوکسین اونتاک یک داروی ویژه برای درمان سرطان جهت بیماران مبتلا به لوکمیا، لنفوما</a> و ملانوما <a name="OLE_LINK16"></a><a name="OLE_LINK15">است. </a>با توجه به رشد چشمگیر سرطان در جامعه امروزی، بومی‌سازی ساخت داروهای نوترکیب امری ضروری به نظر می‌رسد. <a name="OLE_LINK18"></a><a name="OLE_LINK17">در این تحقیق، بهینه‌سازی ترکیب شیمیایی محیط کشت پیچیده برای بیان ایمونوتوکسین نوترکیب اونتاک مورد بررسی قرار گرفت.<o:p /></a> مواد و روش‌ها: این تحقیق یک مطالعه آزمایشگاهی است. ترکیب محیط کشت، غلظت‌های مختلفIPTG به عنوان القاگر و زمان القاء در بیان ایمونوتوکسین نوترکیب اونتاک بهینه‌سازی شد. غلظت سلول بر اساس روش کدورت سنجی در طول موج 600 نانومتر و میزان بیان پروتئین توسط روش SDS-PAGE مورد بررسی قرار گرفت.<o:p /> یافته‌ها:<a name="OLE_LINK4"></a><a name="OLE_LINK3"> </a>محیط کشت پیچیده اصلاح شده حاوی: glucose: 6g/l، K2HPO4: 12.5g/l، KH2PO4: 2.3g/l، Yeast extract:20g/l، Tryptone: 10g/l به عنوان محیط کشت بهینه تعیین گردید. بهترین زمان القاء توسط IPTG با غلظت 0.1mM، در کدورت نوری 3=OD600nm تعیین شد. بیشترین مقدار تولید بیومس و بیان پروتئین هدف در محیط کشت بهینه‌سازی شده به میزان 5/5=OD600nm تعیین گردید.<o:p /> نتیجه‌گیری: استفاده از منبع کربن گلوکز در ترکیب محیط کشت پیچیده نسبت به محیط کشت LB بیان بهتری می‌دهد. همچنین، مقدار بیومس تولید شده نسبت به محیط کشت LB، 5/3 برابر افزایش نشان داد. <o:p /> واژه‌‌های کلیدی: اونتاک، محیط کشت پیچیده، بهینه‌سازی<o:p /> <blockquote style="margin-left: 0px " dir="rtl">Background and Objective: In recent years, the biological methods have been considered as a most promising candidate for the cancer treatment. One of the most applicable methods is recombinant proteins. ONTAK immunotoxin is a special drug for cancer therapy of leukemia, lymphoma and melanoma. With respect to the dramatic growth of cancer in today's society, production of recombinant protein drugs seems to be necessary. In this research, optimization of complex culture medium for the expression of ONTAK recombinant has been studied.<o:p /> Materials and Methods: In this experimental study, various concentrations of IPTG (Isopropyl Thiogalactopyranoside) were used as an inductor and the medium components and induction time optimized for expression of ONTAK immunotoxin. The cell concentration was measured by optical density at 600 nm and the protein expression levels were analyzed by SDS-PAGE gel.<o:p /> Results: The modified complex culture medium containing: glucose 6 g/l K2HPO4 12.5 g/l KH2PO4 2.3 g/l Yeast Extract 20 g/l Tryptone 10 g/l were determined as optimal medium. OD600nm=3.0 was determined as the best time for induction by IPTG at a concentration of 0.1mM. The maximum amount of the expression of the target protein was determined at OD600nm=5.5.<o:p /> Conclusion: The adding of additive carbon source (glucose) to the complex medium was caused a better ONTAK immunotoxin expression as compared with the amount of expression observed in LB medium. The amount of produced biomass on the optimized medium increased over 3.5 times in comparison to LB medium.<o:p /> Key words: ONTAK, Complex culture medium, Optimization<o:p />   <p class="MsoNormal" style="text-align: left line-height: 150% background-image: initial background-attachment: initial background-origin: initial background-clip: initial background-color: white vertical-align: top direction: ltr unicode-bidi: embed ">Funding: This research was funded by Malek Ashtar University of Technology.<o:p /> <p class="MsoNormal" style="text-align: left line-height: 150% background-image: initial background-attachment: initial background-origin: initial background-clip: initial background-color: white vertical-align: top direction: ltr unicode-bidi: embed ">Conflict of interest: None declared.<o:p /> Ethical approval: The Ethics Committee of Malek Ashtar University of Technology.<o:p />   How to cite this article: Heydari M, Robatjazi SM, Zeinoddini M. Investigation of the Complex Culture Medium composition for Improved Production of ONTAK Immunotoxin by Recombinant Escherichia Coli. J RafsanjanUniv Med Sci 2015 13(11): 1083-90. [Farsi]<o:p /></blockquote> اونتاک, محیط کشت پیچیده, بهینه‌سازی ONTAK, Complex culture medium, Optimization 1083 1090 http://journal.rums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1883-1&slc_lang=fa&sid=1 M. Heydari محمد حیدری heydari.m1393@gmail.com 6900319475328460014872 6900319475328460014872 No Malek Ashtar University دانشگاه صنعتی مالک اشتر S.M. Robatjazi سید مرتضی رباط جزی s_m_robatjazi@mut.ac.ir 6900319475328460014873 6900319475328460014873 Yes Malek Ashtar University دانشگاه صنعتی مالک اشتر M. Zeinoddini مهدی زین الدینی zeinoddini@modares.ac.ir 6900319475328460014874 6900319475328460014874 No Malek Ashtar University دانشگاه صنعتی مالک اشتر