fa تهیه نانو واکسن نوترکیب نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E بر پایه کیتوسان و مقایسه ایمنی‌زایی آن به دو روش تزریقی و خوراکی در موش سوری ايمونولوژي ايمونولوژي پژوهشي Research <p dir="RTL" style="margin-right:2.85pt;"><img alt="AWT IMAGE" height="511" src="file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image001.gif" width="602" ><strong>چکیده</strong></p> <p dir="RTL" style="margin-right:2.85pt;"><strong>زمینه و هدف:</strong> بیماری بوتولیسم در اثر مسمومیت با یکی از هفت نوروتوکسین بوتولینوم ایجاد می‌شود. زیر واحد اتصالی این سموم ایمونوژن بوده و کاندید واکسن نوترکیب زیر واحدی علیه این بیماری می‌باشند. با توجه به ایمنی‌زایی پایین پروتئین نوترکیب، استفاده از حاملین مناسب جهت رسانش آنتی‌ژن به سلول‌های هدف، اجتناب‌ناپذیر است. هدف از این تحقیق، ارزیابی استفاده از نانوذرات کیتوسان به عنوان حامل در تجویز خوراکی و تزریقی پروتئین نوترکیب ناحیه اتصالی <span dir="LTR">Botulinum Neurotoxin type E (BoNT/E)</span> بود.</p> <p dir="RTL" style="margin-right:2.85pt;"><strong>مواد و روش‌ها: </strong>در این مطالعه تجربی، نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین نوترکیب ناحیه اتصالی <span dir="LTR">BoNT/E</span> با روش ژلاسیون یونی تهیه و به صورت خوراکی و تزریقی به 5 گروه موش‌ سوری تجویز شدند. تیتر آنتی‌بادی <span dir="LTR">IgG</span> ضد نورتوکسین بوتولینوم با روش الایزا مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت، تمام گروه‌ها با نوروتوکسین فعال بوتولینوم تیپ <span dir="LTR">E</span> چالش شدند و داده‌های بدست آمده با آزمون <span dir="LTR">t-test</span> مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.</p> <p dir="RTL" style="margin-right:2.85pt;"><strong>یافته‌ها:</strong> میزان تولید آنتی‌بادی <span dir="LTR">IgG</span> ضد نورتوکسین بوتولینوم پس از هر بار تزریق در همه گروه‌های مورد آزمون، افزایش یافت. استفاده از نانوذرات کیتوسان، افزایش معنی‌داری در میزان تولید آنتی‌بادی <span dir="LTR">IgG</span> ضد نورتوکسین بوتولینوم به دنبال نداشت <span dir="LTR">(p>0.05)</span>. <a name="_GoBack"></a>با مقایسه تیتر آنتی‌بادی <span dir="LTR">IgG</span> ضد نوروتوکسین بوتولینوم در موش‌های ایمن شده با نانوذرات حاوی آنتی‌ژن از طریق خوراکی و تزریقی تفاوت معنی‌داری مشاهده نشد <span dir="LTR">(p>0.05)</span>. در چالش با نوروتوکسین فعال بوتولینوم تیپ <span dir="LTR">E</span>، موش‌هایی که به صورت خوراکی ایمن شده بودند، 500 برابر <span dir="LTR">LD₅₀</span> را تحمل کردند.</p> <p dir="RTL" style="margin-right:2.85pt;"><strong>نتیجه‌گیری: </strong>نتایج این تحقیق نشان داد پروتئین نوترکیب <span dir="LTR">BoNT/E</span> به تنهایی قادر است از طریق سیستم گوارش، جذب و منجر به بروز پاسخ ایمنی مؤثر شود. نتایج چالش نشان داد پاسخ ایمنی ایجاد شده در تجویز خوراکی، مؤثر و در تجویز تزریقی ناکارآمد بود.</p> <p dir="RTL" style="margin-right:2.85pt;"><strong>واژه‌های کلیدی:</strong> نانوذرات کیتوسان، واکسن خوراکی، ژلاسیون یونی، واکسن نوترکیب، نوروتوکسین بوتولینوم تیپ <span dir="LTR">E</span></p> <pre> <strong>Background and Objectives</strong>: Botulism syndrome is caused by one of the seven botulinum neurotoxins<span dir="RTL">.</span> The toxins binding domain have immunogenicity effect and can be used as a recombinant vaccine candidate against botulism disease. Due to the low immunogenicity of recombinant protein , the use of an appropriate vehicle for antigen delivery to target cells is inevitable. The purpose of this study was to evaluate the use of chitosan nanoparticles as carriers for oral and injection administration of Botulinum Neurotoxin Type E (BoNT/E<span dir="RTL">(</span> binding domain recombinant protein.</pre> <pre> <strong>Materials and Methods: </strong>In this experimental study Chitosan nanoparticles containing BoNT/E binding domain recombinant protein were prepared by ionic gelation method and were administered orally and subcutaneously into 5 groups of mice. IgG anti-BoNT/E binding domain titers were assayed by ELISA. Finally all groups were challenged with active botulinum neurotoxin type E and data were analyzed by t-test.</pre> <pre> <strong>Results:</strong>In all groups after each administration, the amount of IgG anti-BoNT/E increased. Chitosan nanoparticles did not show a significant increase in the production of IgG anti-BoNT/E binding domain (p>0.05). There was not a significant difference in IgG anti-BoNT/E titre of the mice immunized with nanoparticles containing antigens in the oral and intradermal route (p>0.05). The challenge with active neurotoxin botulinum type E showed that the mice immunized orally, can tolerate 500 folds LD₅₀.</pre> <pre> <strong>Conclusion:</strong>The results of this study showed that the recombinant protein of BoNT/E is able to be absorbed through the digestive system and induce an&nbsp; effective immune response. The challenge of immunized mice with active botulinum neurotoxin type E created immune response in oral administration was effective but it was ineffective in injection administration.</pre> <p><strong>Key words<em>: </em></strong>Chitosan nanoparticles, Oral vaccine, Ionic gelation, Recombinant vaccine, BoNT/E</p> <p></p> <p><strong>Funding:</strong> This research was funded by Imam Hosein University.</p> <p><strong>Conflict of interest:</strong> None declared.</p> <p><strong>Ethical approval:</strong> The Ethics Committee of Imam Hosein University approved the study.</p> <p></p> <p style="margin-left:.7pt;"><strong>How to cite this article:</strong> Bagheripour MJ, Ebrahimi F, Hajizadeh A, Nazarian Sh, Arefpour MA, Rashidiani J<em>. </em>Preparation of Chitosan Based Botulinum Neurotoxin E Recombinant Nanovaccine and Evaluation of its Immunogenicity as Oral & Intradermal Route in Mice<em>. J RafsanjanUniv Med Sci</em> 2016; 14(11): 923-38. [Farsi]</p> نانوذرات کیتوسان, واکسن خوراکی, ژلاسیون یونی, واکسن نوترکیب, نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E Chitosan nanoparticles, Oral vaccine, Ionic gelation, Recombinant vaccine, BoNT/E 923 938 http://journal.rums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2204-1&slc_lang=fa&sid=1 M.J. Bagheripour محمدجواد باقری پور mjbagherii@gmail.com 6900319475328460019441 6900319475328460019441 No دانشگاه جامع امام حسین (ع) F. Ebrahimi فیروز ابراهیمی febrhimi@ihu.ac.ir 6900319475328460019442 6900319475328460019442 Yes دانشگاه جامع امام حسین (ع) A. Hajizadeh عباس حاجی زاده abbashajizade@gmail.com 6900319475328460019443 6900319475328460019443 No دانشگاه جامع امام حسین (ع) Sh. Nazarian شهرام نظریان nazarian56@gmail.com 6900319475328460019444 6900319475328460019444 No دانشگاه جامع امام حسین (ع) M.A. Arefpour محمدعلی عارف پور maarefpour45@gmail.com 6900319475328460019445 6900319475328460019445 No دانشگاه جامع امام حسین (ع)