Journal of Rafsanjan University of Medical Sciences

fa بررسی بیان ژن lnT هلیکوباکتر پیلوری در سلول‌های HDF انسان به روش RT-PCR Survey of Helicobacter Pylori lnT Gene Expression in HDF Cells by RT-PCR Method زيست شناسي زيست شناسي كاربردي Applicable چکیده زمینه و هدف: هلیکوباکتر پیلوری، باکتری مارپیچی شکل و گرم منفی است که موجب بیماریهای معده و دوازدهه در انسان میشود. به دلیل وجود ایراداتی در درمانهای آنتیبیوتیکی، تلاشهای رو به افزایشی در جهت تولید واکسن مؤثر برای این عفونت صورت گرفته است. هدف از این تحقیق، ساخت سازواره ژنی حامل قطعه ژن lnT و بررسی بیان آن در سلولهای انسانی به روش RT-PCR است.   مواد و روش‌ها: در این مطالعه آزمایشگاهی، ژن lnT از ژنوم هلیکوباکتر پیلوری به روش واکنش زنجیرهای پلیمراز (Polymerase Chain Reaction) جدا شد. همسانه‌سازی محصولات PCR به روش کلون‌سازی T/A در وکتور T مناسب، انجام شد. سپس ژن lnT در وکتور بیانی یوکاریوتی pEGFP-C2 سابکلون گردید. جهت بررسی بیان ژن lnT، سازواره pEGFP-C2-lnT به روش الکتروپوریشن به سلولهای فیبروبلاست پوست انسان منتقل و بیان آن به روش RT-PCR بررسی شد. یافتهها: انجام PCR منجر به تکثیر قطعه 1290 جفت بازی مربوط به ژن lnT گردید. این ژن با موفقیت در وکتور pTZ همسانه‌سازی شد و نتایج هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد ژن lnT در وکتور بیانی سابکلون گردیده و سازواره نهایی pEGFP-C2-lnT ایجاد شده است. بررسی بیان این ژن به روش RT-PCR، تشکیل باند اختصاصی این ژن را نشان داد. نتیجهگیری: ژن lnT همسانه‌ سازی شده در وکتور بیانی یوکاریوتی pEGFP-C2، توان تولید محصول اختصاصی این ژن در سلولهای یوکاریوتی را دارد. لذا بهنظر می‌رسد این سازواره ژنی، از پتانسیل لازم برای بررسی ایمنیزایی در مدل حیوانی به عنوان واکسن ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری برخوردار باشد.  واژه‌های کلیدی: هلیکوباکتر پیلوری،کلونینگ، ژن lnT، RT-PCR   <pre> Background and Objectives: Helicobacter pylori is a gram-negative and spiral bacterium that causes stomach and duodenal disease in humans. Because of the presence of disadvantages in antibiotic therapies, increasing efforts  have been made to produce effective vaccine for this infection. The aim of this study was to generate a construct   carrying the lnT gene and to survey its expression in human cells with RT-PCR method. </pre> <pre> Materials and Methods: In this laboratory study, lnT gene from the genome of Helicobacter pylori bacterial was isolated via polymerase chain reaction (PCR). Cloning of the PCR products was done by T/A cloning method in the appropriate T vector. Then, the lnT gene was subcloned into a pEGFP-C2 eukaryotic expression vector. To study the lnT gene expression, the final pEGFP-C2-lnT construct was transformed into human dermal fibroblasts (HDF) cells by electroporation and its expression was analyzed by RT-PCR. Results: The performance of the PCR resulted  in amplification of 1290 bp segment as to lnT gene. This gene was successfully cloned in pTZ vector and enzyme digestion and sequencing results showed lnT gene was subcloned in the expression vector and final construction of the pEGFP-C2-lnT was created. Gene expression analysis by RT-PCR showed the relevant band. Conclusion: Based on the obtained results, lnT gene cloned in the pEGFP-C2 eukaryotic expression vector has the ability to produce  the specific product of this gene in eukaryotic cells. Therefore, this gene construction has the required potential to evaluate the immunogenicity in an animal model as a gene vaccine against Helicobacter pylori. Key words: Helicobacter pylori, Cloning, lnT gene, RT-PCR   Funding: This research was funded by Shahrekord Branch, Islamic Azad University. Conflict of interest: None declared. Ethical approval: The Ethics Committee of Department of Biology, Shahrekord Branch, Islamic Azad University approved the study (IR.IAUSHK.1395.5213).   How to cite this article: Rahmani-Piani R, Doosti A. Survey of Helicobacter Pylori lnT Gene Expression in HDF Cells by RT-PCR Method. J Rafsanjan Univ Med Sci 2017; 16(9): 807-18. [Farsi] </pre> هلیکوباکتر پیلوری,کلونینگ, ژن lnT, RT-PCR Helicobacter pylori, Cloning, lnT gene, RT-PCR 807 818 http://journal.rums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2963-1&slc_lang=fa&sid=1 R. Rahmani-Piani راضیه رحمانی پیانی newsgenetic@yahoo.com 6900319475328460035326 6900319475328460035326 No Department of Biology, Faculty of Basic Science, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد A. Doosti عباس دوستی abbasdoosti@yahoo.com 6900319475328460035327 6900319475328460035327 Yes Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد