چکیده
زمینه و هدف: هلیکوباکتر پیلوری، باکتری مارپیچی شکل و گرم منفی است که موجب بیماریهای معده و دوازدهه در انسان میشود. به دلیل وجود ایراداتی در درمانهای آنتیبیوتیکی، تلاشهای رو به افزایشی در جهت تولید واکسن مؤثر برای این عفونت صورت گرفته است. هدف از این تحقیق، ساخت سازواره ژنی حامل قطعه ژن lnT و بررسی بیان آن در سلولهای انسانی به روش RT-PCR است.
مواد و روشها: در این مطالعه آزمایشگاهی، ژن lnT از ژنوم هلیکوباکتر پیلوری به روش واکنش زنجیرهای پلیمراز (Polymerase Chain Reaction) جدا شد. همسانهسازی محصولات PCR به روش کلونسازی T/A در وکتور T مناسب، انجام شد. سپس ژن lnT در وکتور بیانی یوکاریوتی pEGFP-C2 سابکلون گردید. جهت بررسی بیان ژن lnT، سازواره pEGFP-C2-lnT به روش الکتروپوریشن به سلولهای فیبروبلاست پوست انسان منتقل و بیان آن به روش RT-PCR بررسی شد.
یافتهها: انجام PCR منجر به تکثیر قطعه 1290 جفت بازی مربوط به ژن lnT گردید. این ژن با موفقیت در وکتور pTZ همسانهسازی شد و نتایج هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان داد ژن lnT در وکتور بیانی سابکلون گردیده و سازواره نهایی pEGFP-C2-lnT ایجاد شده است. بررسی بیان این ژن به روش RT-PCR، تشکیل باند اختصاصی این ژن را نشان داد.
نتیجهگیری: ژن lnT همسانه سازی شده در وکتور بیانی یوکاریوتی pEGFP-C2، توان تولید محصول اختصاصی این ژن در سلولهای یوکاریوتی را دارد. لذا بهنظر میرسد این سازواره ژنی، از پتانسیل لازم برای بررسی ایمنیزایی در مدل حیوانی به عنوان واکسن ژنی علیه هلیکوباکتر پیلوری برخوردار باشد.
واژههای کلیدی: هلیکوباکتر پیلوری،کلونینگ، ژن lnT، RT-PCR
بازنشر اطلاعات | |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |