fa تشخیص مولکولی ژن‌های بتالاکتاماز blaTEM، blaCTX و blaSHV در سویه‌های باسیلوس سوبتیلیس جدا شده از نمونه‌های شیر خام و پنیر: یک مطالعه آزمایشگاهی ميكروبيولوژي Microbiology پژوهشي Research <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">چکیده</span></span></strong><strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span></strong><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">زمینه و هدف:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">سویه‌های مولد بتالاکتاماز وسیع الطیف </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">(Extended spectrum </span></span><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="font-family:times new roman,serif;">&beta;-lactamase; </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">ESBLs)</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> برای سیستم بهداشتی مشکلات زیادی ایجاد کرده است. علاوه بر این، این سویه‌ها باعث افزایش مقاومت به سایر آنتی‌بیوتیک‌ها نیز شده است. لذا این مطالعه با هدف تعیین تشخیص مولکولی ژن‌های بتالاکتاماز </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">bla</span></span></em>_{<span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">TEM</span></span>}<span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">، </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">bla</span></span></em>_{<span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">CTX</span></span>}<span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">bla</span></span></em>_{<span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">SHV</span></span>}<span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> در سویه‌های باسیلوس سوبتیلیس جدا شده از نمونه‌های شیر خام و پنیر انجام شد.</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"></span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">مواد و روش‌ها:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">در</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">این</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">مطالعه آزمایشگاهی،</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">تعداد</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">100</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">نمونه شیر خام و پنیر</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">تهیه و</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">کشت</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">داده شد. کلونی‌های</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">مشکوک</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">به</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">باسیلوس سوبتیلیس با</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">روش‌های</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">بیوشیمیایی</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">تعیین</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">هویت</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">شدند. برای</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">سنجش حساسیت</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">آنتی&shy;بیوتیکی</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">از</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">روش</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">دیسک دیفیوژن</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">استفاده</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">شد. </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">هم&shy;چنین حضور ژن‌های بتالاکتاماز وسیع الطیف </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">bla</span></span></em>_{<span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">TEM</span></span>}<span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">، </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">bla</span></span></em>_{<span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">CTX</span></span>}<span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">bla</span></span></em>_{<span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">SHV</span></span>}<span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> در سویه‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">ESBLs</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> با استفاده از روش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">PCR</span></span> <strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">(</span></span></strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Polymerase chain reaction<strong>)</strong></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> مورد ارزیابی قرار گرفت. </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">داده&shy;ها با استفاده از آزمون مجذور کای آنالیز و به&shy;صورت </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">آمار توصیفی (تعداد و درصد) </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">گزارش شد.</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"></span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">یافته‌ها:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">بالاترین میزان مقاومت در ایزوله‌هایی که قادر به تولید آنزیم بتالاکتاماز بودند، مربوط به آنتی‌بیوتیک اریترومایسین (75 درصد) و کمترین مربوط به آنتی‌بیوتیک </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">سفوتاکسیم (60/44 درصد) </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">و</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> سفیکسیم</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">(20/46 درصد) </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">بود. </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">از 50 نمونه شیر خام، در 21 نمونه، ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">TEM</span></span> <strong><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="font-family:times new roman,serif;">(</span></span></strong><span dir="LTR" style="background:white;"><span style="font-family:times new roman,serif;">Temoneira<strong>)</strong></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">، در 16 نمونه،&nbsp; ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">CTX</span></span> <strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">(</span></span></strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Cephotaximase<strong>)</strong></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و هم</span></span><span style="font-family:cambria,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">&shy;</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">چنین در 3 نمونه، ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">SHV</span></span> <strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">(</span></span></strong><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">Sulfhydryl-variable<strong>)</strong></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> شناسایی شد. از 50 نمونه پنیر، 17 نمونه (94/45 درصد) حاوی ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">TEM</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">، 13 نمونه (13/35 درصد) ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">CTX</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و هم&shy;چنین در 2 نمونه (40/5 درصد) ژن</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">SHV</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> شناسایی شد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">نتیجه‌گیری:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">با توجه به نتایج، در کنار استفاده از روش‌های فنوتیپی</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">جهت</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> تشخیص آنزیم‌های بتالاکتاماز، به کارگیری روش‌های مولکولی جهت تشخیص کامل این نوع مقاومت‌ها امری ضروری به&shy;نظر می‌رسد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">واژه‌های کلیدی:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">باسیلوس سوبتیلیس، شیر، </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">بتالاکتاماز</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">، آنتی‌بیوتیک‌ها، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">BelaCTX</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span><br> <p></p> <strong>Background and Objectives:</strong> The presence of ESBLs (Extended spectrum &beta;-lactamase) for the health system has many problems. Moreover, these strains have increased resistance to other antibiotics.The aim of this study was to determine the molecular detection of blaTEM, blaCTX and blaSHV beta-lactamase genes in Bacillus subtilis strains isolated from raw milk and cheese samples.<br> <strong>Materials and Methods:</strong> In this laboratory study, 100 samples of raw milk and cheese were prepared and cultured. The suspicious colonies of Bacillus subtilis were identified by biochemical methods. Disc diffusion method was used to measure antibiotic susceptibility. Also, the presence of blaTEM, blaCTX and blaSHV beta-lactamase genes in ESBLs strains was evaluated by PCR (Polymerase reaction chain) method. Data were analyzed using chi-square test and &nbsp;reported in the form of &nbsp;descriptive statistics (number and percentage).<br> <strong>Results:</strong> The highest resistance in isolates that were able to produce the &beta;-lactamase enzyme was related to erythromycin antibiotics (75%) and the least was related to cefotaxime (44.60%) and cefixime (46.20%) antibiotics. Of the 50 raw milk samples,&nbsp; TEM <em><em>(Temoneira</em></em>) gene was identified in 21samples, CTX &nbsp;(Cefotaximase) gene in 16 and SHV (<em>Sulfhydryl</em>-<em>variable</em><em><em>)</em></em> gene in 3 samples. Of the 50 cheese samples, 17 (45.94%) samples contained &nbsp;TEM gene, 13 (35.13%) CTX gene and 2 (5.40%) SHV gene.<br> <strong>Conclusion:</strong> According to the results, the use of molecular methods along with phenotypic methods seems necessary to fully recognize these types of resistance.<br> <strong>Key words: </strong>Bacillus subtillis, Milk, Beta-lactamase, Antibiotics, BelaCTX<br> &nbsp;<br> <strong>Funding:</strong> This research was funded by University of Mohaghegh Ardabili.<br> <strong>Conflict of interest:</strong> None declared.<br> <a><strong>Ethical approval:</strong></a> <span dir="RTL"><a href="#_msocom_1" id="_anchor_1" name="_msoanchor_1" uage="JavaScript">[j1]</a>&nbsp;</span>The Ethics Committee of Mohaghegh Ardabili University approved the study.<br> &nbsp;<br> &nbsp;<br> <strong>How to cite this article: </strong>Ghazaei S,&nbsp; Azizpour A. Molecular Detection of <em>blaTEM</em>, <em>blaCTX</em> and <em>blaSHV</em> beta-lactamase Genes in Bacillus Subtilis Strains Isolated from Samples of Raw Milk and Cheese. <em>J Rafsanjan</em> <em>Univ Med Sci</em> 2018; 17 (8): 745-58. [Farsi]<span dir="RTL"></span><br> &nbsp; <div> <hr align="left" size="1" width="33%" > <div> <div id="_com_1" uage="JavaScript"><a name="_msocom_1"></a><span dir="LTR">&nbsp;<a href="#_msoanchor_1">[j1]</a></span>کد اخلاق ذکر گردد.<span dir="LTR"></span></div> </div> </div> <p></p> باسیلوس سوبتیلیس, شیر, بتالاکتاماز, آنتی‌بیوتیک‌ها, BelaCTX Bacillus subtillis, Milk, Beta-lactamase, Antibiotics, BelaCTX 745 758 http://journal.rums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3340-1&slc_lang=fa&sid=1 C. Ghazaei سیامک قضائی ciamakghazaei@yahoo.com 6900319475328460031429 6900319475328460031429 No Ministry of Science, Research and Technology دانشگاه محقق اردبیلی A. Azizpour آیدین عزیز پور 6900319475328460031430 6900319475328460031430 Yes Ministry of Science, Research and Technology دانشگاه محقق اردبیلی