مجله علمی دانشگاه علوم پزشکی رفسنجان

مقاله پژوهشی

مجله دانشگاه علوم پزشکی رفسنجان

دوره 14، اردیبهشت 1394، 160-151

بررسی فعالیت ضد قارچی عصاره کیوی بر روی قارچ‌های ساپروفیت و درماتوفیت

آی سن قرنجیک^[1]، نورجمال گری¹، زهرا آرخی¹، نویسا سید قاسمی^[2]، زیبا عباسی‌نژاد^[3]، حدیثه قلیشلی¹، سارا نادمی¹، فرهاد نیک‌نژاد^[4]

دریافت مقاله: 6/10/93      ارسال مقاله به نویسنده جهت اصلاح: 7/11/93    دریافت اصلاحیه از نویسنده: 17/12/93    پذیرش مقاله: 19/1/94

چکیده

زمینه و هدف: گزارشات اندکی از اثر ضد قارچی کیوی وجود دارد. این مطالعه با هدف بررسی اثر ضد قارچی کیوی بر روی گروهی از قارچ‌های ساپروفیت و درماتوفیت ترایکوفایتون منتاگروفایتیس برای اولین بار در ایران مد نظر قرار گرفت.

مواد و روش‌ها: در یک مطالعه آزمایشگاهی، سوسپانسیون قارچی حاوی CFU/mL 1×10⁵ از اسپور و سلول‌های مخمری 9 قارچ انتخاب شد و در سرم فیزیولوژی حاوی نیم درصد تویین 80 آماده گردید. برای تعیین MIC و MFC قارچ‌ها نسبت به عصاره الکلی کیوی از رقت‌سازی سریال در محیط سابورو دکستروز براث استفاده گردید.کاندیدا‌ها و آسپرژیلوس‌ها به ترتیب در دمای 30 و 25 درجه سانتی‌گراد به مدت 72-24 ساعت قرار داده شدند. جهت آنالیز داده‌ها از روش t مستقل، کروسکال والیس با سطح معنی‌داری 05/0p< استفاده شد.

یافته‌ها: نتایج حاصل از آزمون‌های آماری بین نوع قارچ‌های مورد بررسی و درصد کاهش رشد بین ساپروفیت‌ها و درماتوفیت در دو غلظت 10% و20% و در دو ساعت 24 و 48 ساعت اولیه اختلاف آماری معنی‌داری نبود. میزان MIC و MFC در قارچ‌های مورد مطالعه به ترتیب در محدوده mg/mL 5/7-87/1 و mg/mL  15-75/3 قرار گرفت.

نتیجه‌گیری: این پژوهش نشان داد عصاره الکلی کیوی دارای خاصیت ضد قارچی است که این خصوصیت بسته به جنس قارچ متفاوت می‌باشد.

واژه‌های کلیدی: خاصیت ضد قارچی، ترایکوفایتون منتاگروفایتیس، قارچ‌های ساپروفیت، کیوی

مقدمه

یکی از مشکلات بزرگ در سلامت جوامع ظهور و گسترش مقاومت قارچ‌ها نسبت به داروهای ضد قارچی مصنوعی می‌باشد. داروهای ضد قارچی شیمیایی با ساختمان شیمیایی و سازوکار متفاوت برای درمان وجود دارند ولی در بسیاری از موارد به دلیل مقاومت به این داروها بیماری به اشکال مزمن یا حاد تبدیل شده و گاهی عود‌های مکرر دیده می‌شود. از طرفی نیاز به مصرف طولانی مدت داروهای ضد قارچی در برخی از موارد خود باعث بروز عوارض جانبی ناشی از مصرف شده و محدودیت‌هایی را در استفاده از این ترکیبات به وجود آورده است [2-1].

عفونت‌هایی که توسط ارگانیسم‌های مقاوم به وجود می‌آیند، جمعیت انسانی و حتی گونه‌های حیوانی و گیاهی را در معرض قرار داده و از راه‌های گوناگون می‌توانند باعث انتشار جدایه‌های مقاوم گردند. امروزه تلاش‌های محققان بر استفاده محدودتر از داروهای ضد میکروبی و پیشگیری از بروز عفونت‌ها و دستیابی به ترکیبات جدید ضد میکروبی بوده و پژوهش‌های بیشتری در این راستا در حال اجرا بوده و استفاده از ترکیباتی که برای انسان سمیت و اثرات جانبی کمتر داشته باشد مورد توجه قرار گرفته است [4-3].

در حال حاضر بخش عظیمی از داروهای مصرفی شیمیایی هستند ولی برآورد می‌شود دست کم یک سوم کلیه فرآورده‌های دارویی منشاء گیاهی داشته یا پس از استخراج از گیاه تغییر شکل یافته‌اند. گیاهان دارویی به اشکال مختلف در درمان بیماری‌ها، تنظیم سیستم ایمنی یا عوارض ناشی از بیماری‌ها و همچنین، اثرات ضد توموری یا ضد میکروب به کار می‌روند [5-4].

از آن جایی که عفونت‌های قارچی و سیستمیک غالباً به وسیله مخمرهای مقاوم به داروهای ضد قارچی نظیر فلوکونازول ایجاد می شود لذا پژوهش در زمینه یافتن عصاره‌های گیاهی با خواص ضد میکروبی بالا و حداقل اثرات جانبی روی میزبان و خالص سازی مواد مؤثره آنها می‌تواند در درمان بسیاری از عفونت‌های قارچی مقاوم به داروهای ضد قارچی صناعی کمک کند [7-6].

استفاده از گیاهان دارویی به عنوان ترکیبات سودمند در جوامع کنونی مورد استقبال قرار گرفته و خواص ضد قارچی متعددی از گیاهان مانند عصاره کلاله زعفران عصاره‌های آبی و متانولی برگ گیاه حرا، گیاه خرزهره، افسنطین، اکالیپتوس، پیاز، دارچین، زردچوبه، مریم گلی، نعناع و همیشه بهار به اثبات رسیده است [11-8]. با توجه به اهمیت کنترل و درمان عفونت‌های قارچی، شناسائی ترکیبات گیاهی مؤثر می‌تواند ضمن غلبه بر مقاومت‌های دارویی هزینه‌های اضافی جهت درمان بیماران را کاهش دهد [12].

میوه کیوی که سرشار از ویتامین C، ویتامین E و پلی‌فنل‌ها می‌باشد در کاهش بیماری‌های قلبی عروقی مفید است [13] و حاوی مقدار فیبر بالایی می‌باشد. نتایج پژوهش‌های انجام شده نشان می‌دهند کیوی می‌تواند در درمان یبوست در بزرگسالان مورد استفاده قرار گیرد [14]. با توجه به گزارشات اندکی که از اثر ضد قارچی کیوی موجود می‌باشد اثر ضد قارچی کیوی بر روی گروهی از قارچ‌ها برای اولین بار در ایران مد نظر قرار گرفت.

مواد و روش‌ها

در یک مطالعه آزمایشگاهی جدایه‌های قارچی از نمونه‌های بالینی موجود در آزمایشگاه قارچ‌شناسی دانشکده پیراپزشکی دانشگاه علوم پزشکی گلستان استفاده شد. کلنی‌ها قارچ‌های

(Trichophyton mentagrophytes, Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus niger, Candida albicans (Fluconazole Resistanse), Candida glabrata, Candida albicans)

پس از احیاء و کنترل خالص بودن در محیط سابورو دکستروز آگار (SDA) جهت تهیه سوسپانسیون استفاده شد. از تک کلونی خالص توسط سرم فیزیولوژی استریل حاوی توئین 80 سوسپانسیون سلولی تهیه و با استفاده از لام نئوبار غلظتCFU/mL  1×10⁵ تهیه شد و در تمام مراحل کار از این سوسپانسیون استفاده گردید. عصاره الکلی کیوی توسط شرکت گیاه اسانس گرگان با غلظت اولیه 3 گرم ماده ی خشک در 100میلی‌لیتر حلال تهیه گردید. برای رقیق‌سازی عصاره با استفاده از پروپیلن گلیکول رقت‌های، 2/1، 4/1، 8/1، 16/1، 32/1، 64/1، 128/1 تهیه شد.

چاهک‌گذاری در محیط حاوی عصاره بر اساس اندازه‌گیری قطر‌هاله رشد برای قارچ‌های ساپروفیت و درماتوفیت وشمارش تعداد کلنی برای کاندیداها انجام شد. غلظت‌های 20% (g/ml 0035/0) و 10% (g/ml0018/0) از عصاره را در محیط SDA و استریل که به دمای 50-40 درجه سانتی‌گراد رسیده تهیه کرده و در داخل پلیت‌های استریل تقسیم گردید. پس از منعقد شدن محیط‌ها، با استفاده از انتهای پیپت پاستور استریل چاهکی به قطر 6/0 میلی‌متر در وسط پلیت ایجاد گردید.

برای قارچ‌های ساپروفیت و درماتوفیت از سوسپانسیون سلولی قارچی تهیه شده به مقدار 50 میکرولیتر در پلیت تلقیح شد. برای کاندیداها 50 میکرولیتر از سوسپانسیون سلولی کاندیدا‌های مورد مطالعه برداشته و به صورت یکنواخت در سطح پلیت‌های حاوی غلظت‌های 20% و 10% از عصاره الکلی کیوی کشت سفره‌ای داده شد. از پلیت‌های حاوی فلوکونازول و فاقد فلوکونازول جهت کنترل مثبت و منفی به ترتیب استفاده گردید. سپس پلیت‌های کشت داده شده در گرمخانه 37 درجه سانتی‌گراد قرار داده شد و نتایج حاصل از رشد قارچ‌ها روزانه بررسی گردید. برای کاندیداها شمارش تعداد کلونی‌های قارچی روی محیط کشت و برای ساپروفیت‌ها و درماتوفیت‌ها قطر ‌هاله رشد پس از رشد پلیت‌های کنترل منفی اندازه گیری و ثبت گردید.

به منظور بررسی اثرات ضد قارچی عصاره الکلی کیوی تعیین MIC عصاره به روش ماکرو دایلوشن (رقت سازی در لوله) انجام شد [15]. رقت‌های سریالی از 2/1 تا 128/1 از عصاره در محیط سابورو دکستروز براث (SDB) تهیه گردید. برای کنترل منفی از محیط SDB و سوسپانسیون قارچی و برای کنترل مثبت به عنوان شاهد داروی از محیط SDB حاوی داروی فلوکونازول و برای کنترل استریل بودن محیط از لوله حاوی محیط SDB استفاده گردید. سپس لوله‌های مربوط به قارچ‌های ساپروفیت و درماتوفیت به مدت 48 ساعت ولوله‌های مربوط به کاندیداها به مدت 24 ساعت در 37 درجه سانتی‌گراد گرمخانه‌گذاری گردید. پس از طی این مدت کدورت لوله‌ها و رشد قارچ‌ها در مقایسه با کنترل‌ها مورد ارزیابی قرار گرفته و لوله‌های با کمترین غلظت عصاره که فاقد رشد قارچ بود و کدورتی در آنها مشاهده نشده بود به عنوان MIC در نظر گرفته شد.

در مرحله بعد از محتوی لوله MIC و دو لوله قبل از آن به مقدار 20 میکرولیتر روی محیط SDA کشت داده شدند و برای قارچ‌های ساپروفیت و درماتوفیت به مدت 48 ساعت و کشت‌های مربوط به کاندیداها به مدت 24 ساعت در 37 درجه سانتی‌گراد قرار داده شد (با توجه به زمان‌های مختلف رشد در درماتوفیت‌ها همواره پس از مقایسه با کنترل منفی نتایج ثبت گردید). بالاترین رقت موجود از عصاره که رشد قارچ مشاهده نگردید به عنوان MFC این عصاره در نظر گرفته شد. برای تجزیه و تحلیل داده‌ها از نرم‌افزار SPSS و با سطح معنی‌داری 05/0p< در صورت نرمال بودن توزیع مشاهدات از روش t مستقل و در غیر این صورت از تست کروسکال والیس استفاده شد.

نتایج

در بین قارچ‌های ساپروفیت (A.niger, A.parasiticus, A.flavus, A.fumigatus) بدون در نظر گرفتن اثر نوع قارچ میانگین درصد کاهش رشد بین دو غلظت در 48 و 72 ساعت از لحاظ آماری با هم اختلاف معنی‌داری ندارند. (37/0=p) همچنین، بدون در نظر گرفتن اثر نوع قارچ میانگین درصد کاهش رشد بین 48 ساعت و 72 ساعت اولیه در غلظت 10% (094/0=p) و 20%. (54/0=p) اختلاف آماری معنی‌داری وجود نداشت. در این گروه از ساپروفیت‌ها بدون در نظر گرفتن اثر غلظت و اثر زمان بین میانگین درصد کاهش رشد این 4 قارچ ساپروفیت اختلاف آماری معنی‌دار وجود دارد (045/0=p) (جداول 1 و 5(.

جدول 1- درصد کاهش رشد در قارچ های رشته ای (درماتوفیت و ساپروفیت) بعد از 48 و72 ساعت در مقایسه با کنترل های مثبت و منفی

جدول 2- درصد کاهش رشد کاندیداها بعد از 24 و 48 ساعت در مقایسه با کنترل های مثبت و منفی

ND^*: Not Determined

در گروه قارچ‌های مخمری ساپروفیت (,Candida albicans (Fluconazole resistanse), Candida albicans Candida glabrata,) بدون در نظر گرفتن اثر نوع قارچ در غلظت 10% (19/0=p) و20% (5/0=p) بین میانگین درصد کاهش رشد 48 ساعت اولیه و 24 ساعت اولیه اختلاف آماری معنی‌داری وجود ندارد. در این گروه (کاندیداها) بدون در نظر گرفتن اثر نوع قارچ در 24 (1=p) و 48 ساعت (4/0=p) بین میانگین درصد کاهش رشد در دو غلظت 10% و20% اختلاف آماری معنی‌دار وجود نداشت (جداول 2 و 4).

حداقل غلظت مهار کنندگی (MIC) عصاره الکلی کیوی روی T.mentagrophyte با غلظت 87/1 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر و حداقل غلظت کشندگی  (MFC)آن 75/3 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر مشاهده شد. میزان MIC و MFC برای Aspergillus flavus،Aspergillus parasiticus  و Aspergillus niger به ترتیب 5/7 و 15 گزارش گردید (جدول 3).

جدول 3- مقادیر MIC و MFC جدایه‌های قارچی مورد بررسی

جدول 4- تأثیر عصاره برکاندیدا ها بدون در نظر گرفتن اثر زمان یا غلظت

جدول 5- تأثیر عصاره برآسپرژیلوس ها بدون در نظر گرفتن اثر زمان یا غلظت

همانگونه که نتایج این پژوهش نشان داد عصاره الکلی کیوی دارای خاصیت ضد قارچی است که این خصوصیت بسته به جنس قارچ متفاوت می‌باشد. با توجه به این که تنها از یک درماتوفیت (ترایکوفایتون منتاگروفایتیس) در این مطالعه استفاده گردید درصد کاهش رشد یکبار در غلظت 20% و یک بار در غلظت 10% در 48 و 72 ساعت اولیه کاهش 100% رشد گزارش گردید. لذا به دلیل عدم وجود مشاهدات کافی (حداقل دو مشاهده از هر گروه) آزمون آماری جهت بررسی فرضیه فوق انجام نشد.

بحث

تحقیق در مورد کشف ترکیبات جدید با خواص ضد میکروبی هم زمان با افزایش مقاومت در قارچ‌ها رو به گسترش است و از آنجا که اسانس و عصاره گیاهی از دیر باز در درمان بیماری‌ها مورد استفاده قرار می‌گرفتند به عنوان یک انتخاب مناسب برای این نوع تحقیقات به شمار می‌روند. مطالعات اندکی به طور اختصاصی بر روی اثرات ضد قارچی کیوی موجود می‌باشد ولی بر اساس نتایج به دست آمده از این تحقیق عصاره الکلی کیوی دارای اثرات ضد قارچ قابل توجهی بوده که این یافته هم راستا با نتایج برخی از مطالعات از جمله Xia و همکارش می‌باشد. آنها پروتئین ضد قارچی به نام اکتینیدین را از کیوی طلایی استخراج نمودند که مشابه پروتئین ضد قارچی تائوماتین از کیوی سبز است. نتایج آنها نشان می‌دهد این پروتئین دارای فعالیت ضد قارچی علیه Fusarium oxysporum بوده اما علیه Botrytis cinerea  هیچ اثر ضد قارچی ندارد. همچنین، در این تحقیق توانایی اکتینیدین برای مهار transcriptase HIV-1 reverse با استفاده از روشELISA  بررسی شد و نتایج نشان داد که اکتینیدین استخراج شده از میوه کیوی طلایی بر خلاف تائوماتین که از میوه کیوی سبز استخراج می‌شود فاقد فعالیت مهاری reverse transcriptase HIV-1 می‌باشد [16].

Wang و همکارش یک پروتئین تک رشته KDa 21 را از میوه کیوی جدا کرده که این پروتئین فعالیت ضد قارچی علیه Botrytis cinerea و اثر مهاری روی Mycosphaerella arachidicola و Coprinus comatus دارد [17].

lahlow و همکارانش فیتوالکسین 7-1، که شامل ترکیبات جدیدی است را از پوست کیوی نارس استخراج کرده سپس فعالیت ضد قارچی این پروتئین را به روش دیسک‌گذاری بررسی کردند. میوه کیوی به علت دارا بودن فیتوالکسین، به آلوده شدن با قارچ Colletotrichu mmusae مقاوم است. اخیرا فایتوالکسین1 شناسایی شده است که شامل ترکیبات 2a,3b,23-trihydroxy-12.20(30)-ursadien-28-oic aci.  است و acid.actinidic نامیده می‌شود. فیتوالکسین 2-6 به عنوان تری‌ترپن‌ها شناخته می‌شوند. اما قبلاً جزو فیتوالکسین‌ها شناخته نمی‌شدند. فیتوالکسین 7 مشابه‌ تری‌ترپن است که شبیه به فیتوالکسین موجود در میوه هلو است [18].

  Motohashiو همکارانش با بررسی فعالیت‌های زیستی عصاره‌های هگزانی، استونی، و متانولی کیوی اثر سایتوتوکسیکی علیه سلول‌های توموری دهان را گزارش کردند. همچنین، ثابت کردند عصاره 70% متانولی کیوی فعالیت قوی ضد  HIVو آنتی‌اکسیدانی نشان می‌دهد و فعالیت ضد باکتریایی عصاره 70% متانولی کیوی عموماً کمتر از عصاره‌های لیپوفیلیک (هگزانی-استونی-متانولی) کیوی می‌باشد ولی فعالیت ضد میکروبی مناسبی مخصوصاً علیهH. pylori  مشاهده نکردند [19].

Niknezhad فعالیت ضد قارچی گیاه رازک منطقه گرگان را بر روی گروهی از قارچ‌ها گزارش نمود. در این مطالعه بررسی اثر ضد قارچی عصاره الکلی رازک بر گروه وسیع تری از قارچ‌های ساپروفیت ودرماتوفیت و کاندیدا مد نظر قرار گرفت [20]، ولی در این مطالعه MIC و MFC نیز تعیین گردید که در نتایج این مطالعه میزان MIC در گونه‌های کاندیدا از همه آسپرژیلوس‌ها به جز آسپرژیلوس فومیگاتوس کمتر ولی از ترایکوفایتون منتاگروفایتیس بیشتر بود و با توجه به مقاومت بالای کونیدی‌های آسپرژیلوس‌ها به ترکیبات ضد قارچی می‌تواند قابل توجیه باشد. میزان MICدر جدایه Candida albicans (Fluconazole resistanse) که مقاوم به فلوکونازول بوده 75/3 مشاهده گردید که مشابه سایر کاندیدا‌ها بود که می‌تواند یافته با ارزشی باشد.

در مطالعهDehghan و همکاران اثرات ضد باکتریایی، ضد قارچی و هم افزایی عصاره کلروفرمی وفراکسیون‌های فعال ریشه گیاه کمای بیایانی ( (CEF1-CEFبر روی برخی باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی و قارچ‌های کاندیدا کفیر و کریپتوکوکوس نئوفورمانس با روش انتشار در آگار تعیین و حداقل غلظت مهارکنندگی بررسی گردید. نتایج نشان داد که عصاره و اجزای حاصله از گیاه کمای بیابانی خواص ضد قارچی و ضد باکتریایی قابل قبولی از خود نشان می‌دهد [21].

در مطالعهKhosravi  و همکاران، اثرات اسانس زیره سبز، کاکوتی و سیاه دانه بر روی آسپرژیلوس فومیگاتوس و آسپرژیلوس فلاووس با استفاده از روش براث ماکرودایلوش تعیین MIC وMFC گردید و نتایج این تحقیق نشان داد که اسانس این سه گیاه دارای اثرات ضد قارچی علیه آسپرژیلوس فومیگاتوس و آسپرژیلوس فلاووس است [22].

در مطالعه Rakhshandeh و همکاران در جهت بررسی اثر ضد میکروبی و ضد قارچی عصاره‌های آبی، الکلی و کلر فرمی ‌اندام‌های هوایی گیاه خرزهره بر روی میکروارگانیسم‌های بیمارستانی و استاندارد از قبیل استافیلوکوک طلایی کوآگولاز مثبت، سودوموناس آئروژینوزا و کاندیدا آلبیکانس، نشان دادند عصاره کلروفرمی، فاقد اثر ضد میکربی و ضد قارچی بوده ولی عصاره‌های آبی در روش رقت آگار، دارای اثرات ضد میکربی و ضد قارچی بودند که عصاره متانولی با غلظت کم‌تر اثرات ضد میکربی و ضد قارچی بیشتری از عصاره آبی نشان داد [10].

عدم دسترسی به جدایه‌های استاندارد حساس و مقاوم از محدودیت‌های مطالعه فعلی بوده و امیدواریم در ادامه کار بتوانیم نتایج جامعتری را منتشر نمائیم. پیشنهاد می‌شود با آنالیز و شناسائی ترکیبات مؤثره کارهای تکمیلی با هدف بررسی این ترکیبات بر روی قارچ‌ها و در نهایت در مدل حیوانی مورد توجه قرار گیرد.

نتیجه‌گیری

با توجه به نتایج مناسب آزمایشگاهی در صورت بررسی بر روی گروه‌های بیشتری از درماتوفیت‌ها ترکیبات حاوی این عصاره می‌تواند به عنوان ضد قارچ در کنترل عفونت‌های قارچی مد نظر قرار گرفته و پس از ارزیابی در مدل حیوانی مورد استفاده قرار گیرد.

تشکر و قدردانی

از معاونت محترم تحقیقات و فناوری دانشگاه علوم پزشکی گلستان بابت حمایت مالی از این طرح دانشجویی و از جناب آقای دکتر سلیمانی مدیر عامل محترم شرکت گیاه اسانس بابت تهیه عصاره کیوی صمیمانه سپاسگزاری و قدردانی می‌گردد.

References

[1] Dassanayke RS, Ellepola AN, Samaranayke YH, Samaranayake LP. Molecular heterogenesity of fluconazole resistance and susceptible oral Candida albicans isolates within a single geographic locale. APMIS 2002; 110: 315-24.

[2] Morshhauser J. The genetic basis of fluconazole resistance development in Candida albicans. Biochemica, Biophisica Acta 2002; 1587: 240-8.

[3] Commission of the European Communities: Communication from the commission on a community strategy Against Antimicrobial Resistsnce. Volume I, Com (2001), 331 final, 2001; pp: 2-7.

[4] Besharat M, Rahimian M, Gaemi E, Besharat S. Effect of etthanolic extract of Adiantum capillus-veneris in comparison with Gentamicin on 3 pathogenic bacteria in vitro. Pharmaceutical Sciences 2009; 15(1): 49-52. [Farsi]

[5] Weinstine RA. Controlling antimicrobial resistance in hospitals: Infection control and use of antibiotics. Emerg Infect Dis 2001; 7(2): 188-92.

[6] Spanakis EK, Aperis G, Mylonakis E. New agents for the treatment of fungal infection: clinical efficacy and gaps in coverage. Clin Infect Dis 2006; 43(8): 1060-8.

[7] Pyun MS, Shin S. Antifungal effects of the volatile oils from Alliume plants against Trichophyton species and synergism of the oils with ketoconazole. Phytomedicine 2006; 13(6): 394-400.

[8] Abdolmaleki M, Bhramynzhad S, Abbasi S, Mahmoudi B. Inhibitory effect of some plant extracts on mycelial growth of Rhizoctonia solani and Phytophthora drechsleri, sugar beet root rot agents. Journal of Sugar Beet 2010; 25(2); 193-205. [Farsi]

[9] Behbehani A,Tabatabaei Yazdi F, Shahidi F, Mohebbi M. The antifungal effect of aqueous and methanol extracts of leaves of mangrove (Avicennia marina) on Alternaria and Penicillium Sytrynvm Ltrnata. Journal of Rafsanjan University of Medical Sciences 2013; 12 (12):1015-24. [Farsi]

[10] Rakhshandeh H, Boroushaki M, Sadeghian A, Parsaee H. Antimicrobial effect of different extracts of Nerium oleander L on standard and clinically isolated microorganism. koomesh 2004; 6 (1): 37-42. [Farsi]

[11] Atai Z, Ansari M, Ayatollah Mousavi A, Mirzaei A. In vitro antifungal effect of extracts of wormwood, eucalyptus, onion, cinnamon, turmeric, sage, mint and evergreens of the standard strains of Candida albicans in comparison with nystatin mouthwash. Journal of Islamic Dental Association 2007; 19 (2): 91-7. [Farsi]

[12] Roudbary M, Roudbar Mohammadi Sh, Hajimoradi M, Taghizadeh A, Ghasemi Sakha F, Vahidi M. Evaluation of antifungal activity of acohlic extract and safranol of Crocus sativum on Candida albicans and Candida dubliniensis growth in vitro. Journal of Jahrom University of Medical Seiences 2009; 7(2): 6. [Farsi]

[13] Duttaroy A, Jørgensen A. Effects of kiwi fruit consumption on platelet aggregation and plasma lipids in healthy human volunteers 2004; 15(5): 287-92.

[14] Chan AO, Leung G, Tong T, Wong NY.Increasing dietary fiber intake in terms of kiwifruit improves constipation in Chinese patients. World J Gastroenterol 2007; 21; 13(35): 4771-5.

[15] Pujol I, Caplla J, Fernandez-Torres B, et al. Use of the sensitive colorimetric microdilution Panel for antifungal susceptibility testing of dermatophytes. J Clin Microbial 2002; 40(7): 2614-21.

[16] Xia L, Ng TB. Actinchinin, a novel antifungal protein from the gold kiwi fruit. Peptides 2004; 25: 1093-8.

[17] Wang H, Tzi Bun Ng. Isolation of an antifungal thaumatin-like protein from kiwi fruits. Phytochemistry 2002; 61(1): 1-6.

[18] Lahlou EI, Hirai N, Kamo T, Tsuda M, Ohigashi H. Actinidic Acid, a New Triterpene Phytoulexin from Unripe Kiwi Fruit .Biosci Biotechenol Biochem 2001; 65(2): 480-3.

[19] Motohashi N, Shirataki Y, Kawase M, Tani S, Sakagami H, Satoh K. et al. Cancer prevention and therapy with kiwifruit in Chinese folklore medicine. Journal of Ethnopharmacology 2002; 81: 357-64.

[20] Niknezhad F. Antifungal Effect of Humulus lupulus on a group of fungi (In vitro method). MSPH thesis, Tehran University of Medical Sciences; 2002.

[21] Dehghan GR, Zarini G R , Hajizadeh M. Phytochemical investigation and antimicrobial, antifungal and synergistic activities of chloroform fractions of the root of Ferula szovitsiana, J Shahrekord Univ Med Sci 2014; 15(6): 10-7. [Farsi]

[22] Hassan Minooeian Haghighi M, Khosravi A. The Effects of the Herbal Essences on the Two Important Species of Aspergillus. Horizon Med Sci 2010; 15 (4): 5-15. [Farsi]